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猪人工授精操作规程

时间:2012-07-13 来源:中国种猪信息网 作者:汪传辉


  人工授精在猪的杂种优势利用中是最经济、最有效的技术措施之一。猪的人工授精工作不仅要有严密的制度而且技术要求高,从采精、检验、稀释、分装、保存、运输一直到输精是一链锁关系的整体,必须一环扣一环,环环不能脱节,无论在哪一个环节出了故障,都可能影响到最后授精效果,因此,技术上必须按照制定的操作规程进行。
1 采精前的准备
1.1 一切和精液接触的器皿应注意严格消毒并防止再受污染。采精杯先用肥皂水洗刷,然后用清水反复冲洗,经  高温煮沸消毒后,置于干燥箱中烤干备用。
1.2 采精前将营养液配好,置于35℃水浴锅中备用。
1.3 取出清洁干燥的保温杯,内衬一次性食品保鲜袋,将三层清洁纱布折叠四次后罩在杯口上,用橡皮筋固定  好,盖上杯子,放入37℃恒温箱中预热。
1.4 保持采精室、工作室的整洁和清洁,防止阳光直接照射,以免对精子造成损害,工作时禁止抽烟,保持环境  安静。在冬夏温度较低和较高时应将空调打开,采精室保持25℃左右的室温。
2 采精
2.1 采精员在上班前后严禁喝酒,指甲要修剪、磨光,用新洁尔灭液消毒双手,然后用清水洗净抹干后戴上双层手套(内层为聚乙烯手套,对精子无毒的专用手套,外层可戴一次性的薄膜手套),穿上清洁的工作服,取出采精杯,方可进行采精。
2.2 公猪在吃食前后半小时内不能进行采精,采精后严禁用水冲洗公猪。
2.3 当公猪爬上假母猪后,应立即蹲下来用0.1%高锰酸钾温水擦洗公猪的下腹部,挤出包皮中的尿液,并用清洁毛巾抹干,脱掉外层手套准备采精。
2.4 当公猪性欲达到旺盛时,它将爬跨台猪,并伸出阴茎龟头来回抽动。这时采精员用温暖清洁的手握紧伸出的龟头,当公猪前冲时将阴茎的“S”状弯曲拉直,不必强拉,充分伸展后,阴茎将停止前冲,开始射精。射精过程中不要松手,否则压力减轻将导致射精中断。采精过程中不要碰阴茎体,否则阴茎将迅速缩回。手握阴茎的力度适中,应以不让其滑落并能抓住为准。用力太小,阴茎容易脱掉,采不到精;用力太大,一是容易损伤阴茎,二是公猪很难射出精液。采精时应尽可能使阴茎保持与地面水平状态,可防止包皮部积尿进入采精杯而杀死精子。
2.5 因公猪个体间神经型的差异,在采精过程中必须要注意调整时间长短和手握节律快慢及握力大小。例如兴奋活泼型公猪在调教中逗留时间要短、手握节律要快、握力要轻,安静型公猪则应缓慢而耐心调教,禁止喧闹,手握住阴茎后应让其在空心拳内来回空插数次,再握紧龟头,节律要放慢,握力要加大,才能使采精取得成功,达到良好的人工授精目的。
2.6 对于12月龄以内的公猪,一般每周采精一次,12~18月龄的公猪每两周采集三次,18月龄以上的公猪可每周采精两次,并且固定好采精频率。所有采精公猪,即使不需要,也应每周采精一次,以保证公猪性欲和精液品质。
3 精液检查
   每次采精后,应立即对采精量、颜色、气味、活力、密度和精子畸形率等项目进行检查,并做好记录。
3.1 采精量:采精量的测定可用电子秤来称量,按每克一毫升计算,一般为150~300克。
3.2 颜色:正常精液的颜色为淡乳白色或灰白色,而且精子密度越高,乳白程度越浓,其透明度也越低。若精液中带有浅绿色或黄色,则是混有脓液或尿液的表现,若带有红色,则可能含有血液。这样的精液视为异常精液,应弃去不用,并应停止采精,及时对公猪进行确诊治疗。
3.3 气味:正常精液的气味应该是略带腥味。若有异常气味可能是混有尿液、脓液或其它异物的表现,应废弃。颜色与气味检查可以结合进行,使鉴定结果更为准确。
3.4 精子活力:精子活力是精液品质的重要指标。精子的活力指精子的直线运动能力,用目测视野中呈直线前进运动的精子数占观察精子总数的百分比表示,采用0.1~1.0十级评分,分为10个等级。若显微镜视野中做直线前进的精子占总精子数的百分率为100%,则评为1.0分,若占90%,则为0.9分,依此类推。滴一滴未稀释的精液在载玻片上,然后将盖玻片轻轻盖上,不能有气泡,放在100倍显微镜下观察。由于精子活力受温度影响较大,因此检查精液前最好将37℃的恒温加热板加热一分钟,然后将玻片放在恒温板上进行观察。由于只有具有前进运动的精子才可能具有正常的生存能力和受精能力,所以精子活率与母畜受胎率密切相关,因此,在采精后、稀释后和输精前都要进行检查。新鲜精液活力要求在0.7以上,保存过的精液精子活力要求在0.6以上方可使用。
3.5 精子密度:精液的精子密度是指每毫升精液中所含精子数。目前测定精子密度的主要方法是目测法、血细胞计数法和光电比色计测定法。
3.5.1 目测法:又称为估测法,这在生产中最常采用,并可与活力检查同时进行,在显微镜下可根据精子稠密的程度,粗略的分为“稠密”、“中等”、“稀薄”3个等级,其判断方法是:通过两个精子之间的距离来判断,若两个精子之间的距离小于一个精子的长度则估测为“稠密”,一般2亿/毫升以上;若两个精子之间的距离小于两个精子的长度而大于一个精子的长度时则估测为“中等”,一般估计为2亿/毫升;若两个精子之间的距离大于两个精子的长度时则估测为“稀薄”,一般估计为小于1亿/毫升。
3.5.2 血细胞计计数检查法:该法最准确,但速度慢。其具体步骤为:以微量取样器取具有代表性的原精100微升,3%的KCl溶液900微升,混匀后,取少量放入计数板的槽中,在高倍镜下计数5个中方格内精子总数,将该数乘以50万即得原精液的精子密度。
3.5.3 光电比色计测定法:现代化养猪企业多数采用这种方法,此种方法简单、快捷、易懂、易操作,重复性好,仪器使用寿命长,但产品价格较昂贵。其基本原理是精子透光性差,精清透光性好。选定550nm一束光透过10倍稀释的精液,光吸收度与精子的密度呈正比的关系,根据所测数据,查对照表可得出精子的密度。该法测定密度的误差约为10%,但这个是生产上可以接受的。
3.6 精子畸形率:初配公猪在使用前及正常使用的配种公猪每月检查一次。凡属于形态和结构不正常的精子统称为畸形精子。精子的形态是否正常,与母畜的受胎率有着密切的关系,如果精液中形态异常的精子所占比例过大,不仅影响受胎率,甚至可能造成遗传障碍。正常精液中畸形精子不可能完全没有,但一般不要超过10%~20%,对受精能力影响不大,如果超过20%以上者,则会影响受精力,不宜做输精用。畸形精子一般可分为4类:头部畸形,如头部巨大,瘦小,细长,圆形,轮廓不明显,皱缩,缺损,双头等;颈部畸形,如颈部膨大,纤细,曲折,不全,带有原生质滴,不鲜明,双颈等;中段畸形,如中段膨大,纤细,不全,带有原生质滴,弯曲,曲折,双体等;主段畸形;如主段弯曲,曲折,回旋,短小,长大,缺陷,带有原生质滴,双尾等。如果带中段原生质的精子增多,说明采精频率过高;如果断尾精子增多,说明公猪受过高温影响或发过烧;其它畸形精子多,可能为先天性。
精子畸形率的检查方法:可通过染色进行精子畸形的判断,常用且简单的方法是伊红苯胺黑染色,取一滴精液于载玻片上,加一滴5%的伊红(水溶性的)溶液,用玻棒搅匀,加两滴苯胺黑(1克苯胺黑+100毫升蒸馏水混合)迅速混合,随后用另一载玻片推成抹片,自然干燥后,在400倍显微镜下观察。
3.7  精液的稀释方法:
3.7.1 精液营养粉的选择:营养粉要根据精液保存的时间长短来选择短效(2-3天)、中效(3-5天)、长效(5-7天)的营养粉,同时要求严格对营养粉的生产日期、保质期、生产厂家等进行选择,营养粉选择质量可靠、知名度比较高、货源充足、信誉高的生产厂家,严禁使用过期、结块、发黄变质的营养粉。
3.7.2 配制营养液:营养液的配制用水应严格使用双蒸水。如果是购买的水,不要一次准备和购买大批量的用水。要小心保存,避免阳光直射。准确称量1000ml水置于干净的塑料杯内,将塑料杯放在磁力搅拌器上,边搅拌边加入营养粉,然后搅拌30分钟。配制好的营养液放置四小时后使用。未使用完的营养液放入冰箱保存,两天内用完。
3.7.3 精液的稀释保存:公猪精液在送到实验室之前一定要注意保温,同时避免阳光直射。用电子秤称量采集精液的重量,根据精子密度计算稀释的倍数。精液稀释倍数由每头份精液含的有效精子数决定,目前一般要求精子数达到40亿/头份以上。精液稀释时一定要注意以精液温度为标准来调节营养液的温度,要求营养液与精液温度相同或温差不超过±0.5℃,若有差异要对营养液温度进行及时调整。精液稀释时营养液顺着玻璃棒沿容器的边缘缓慢加入,并缓慢搅匀。精液采集后先做1:1稀释,经过10分钟后再做1:1稀释,第二次稀释后再过10分钟按照总的稀释量进行稀释。精液稀释时绝对不能将精液加入营养液。稀释好后,将精液按照100ml/头份的标准分装进精液瓶,并且贴上标签。精液灌装时注意要使精液沿输精瓶的瓶内壁上缓慢注入,不要在灌装精液时使精液落差太大。
精液稀释倍数及所需营养液的计算方法:
  如果所采精液的数量为200ml,精子密度为3亿/ml,则总精子数为600亿,按照每头份精液40亿精子计算,可以稀释15头份。则所需营养液的数量为15*100-200=1300ml。第一次稀释时将200ml营养液加入原精中,缓慢搅拌均匀。10分钟后再按照1:1的比例加入400ml营养液。再过10分钟加入余下的700ml营养液即可。 
3.8 精液的保存和运输
3.8.1 稀释好的精液在25℃室温下放置1小时或用干净毛巾包裹后直接移入17℃恒温冰箱保存。不管是瓶装还是袋装的,放置时均要平放,这样能增加精子沉淀后铺开的面积,减少沉淀的厚度,降低精子死亡率。若精液保存时间较长,需要每天上下班各摇匀一次。
3.8.2 精液瓶要放置在加有冰块的保温箱中运输,同时要防止震荡和太阳光照射。
4 发情鉴定与适时输精
  正确判断母猪的发情状况,做到适时配种,是提高母猪受胎率和产仔数的关键。发情鉴定可以通过母猪外阴观察法和公猪试情结合来进行。当母猪处于发情期时,母猪外阴部红肿消退,出现皱纹,阴道颜色呈粉红色,粘液浓度增加有较好拉丝性,并发出特异的叫声。当发情母猪接触到试情公猪时,一般都会表现出典型的“静立反射”,若用手按压背部,则会现出竖耳、站立不动、后肢绷紧、翘尾以准备公猪交配的姿态。
正确选定发情适时输精的母猪。一般从以下五个方面来确定:
  (1)从发情开始时间上确定,简称“经三初四”,即经产母猪从发情开始到第三天选为适时输精时间,初产母猪从发情开始日起到第四天选为适时输精时间。
  (2 )从外阴部形态变化看,如开始发情,母猪外阴部充血红肿,这个时候还不宜输精,当母猪外阴部由深红色转淡红色并开始出现皱纹时,阴户闭合呈线状,有的还会流出少量黏液,这时是适时输精时间。
  (3)从母猪行为表现看,母猪一开始发情,便兴奋不安、爬栏,有的母猪还会鸣叫,经2-3天后由兴奋到安静,出现呆滞不动,如果触摸或脚踏发情母猪时,母猪表现不动,这是适时输精时间,若用脚踏不愿接受并发出叫声,后躯、臀部往下蹲,说明过迟,反之脚踏不停而溜走,眼睛有神,这说明过早。
  (4) 打开阴部看内阴部,粘膜由发情开始充血红色到紫色并出现粘稠黏液时,这是适时配种时间。
  (5)一般来说,母猪断奶后发情时间越早的母猪其发情时间越长,而排卵一般都在发情的后期。输精时间取决于排卵时间,母猪一般在发情后36~48小时排卵,排卵持续时间约为4~8小时,卵子排出后在输卵管内维持受精能力的时间约为8小时。精子在授精之前需要6~8小时才能获能,精子获能后维持授精能力时间约为24小时。断奶后3~4天开始发情的母猪,发情的持续时间在3天或者3天以上,第一次输精时间在发情后30小时,第二次输精间隔16~20小时;发情正常的母猪一般在断奶后第5天开始发情,发情持续2~2.5天,第一次输精在发情开始后12~20小时,间隔12~20小时第二次输精;断奶后6天以上才开始发情的母猪,一般发情持续时间短,仅1~2天,需要在发情后12小时输精,12小时后输第二次。
5输精操作
5.1 输精前,准备好清水、抹布、干燥毛巾、针头、精液、输精管、润滑剂等。
5.2 提前将发情鉴定准确待输精的母猪赶入输精栏。
5.3 将试情公猪赶入待配母猪栏前,让其与待配母猪口鼻接触,要求公猪在走道内不能随意走动。用水清洗母猪的外阴及尾根部,清洗完毕后用干净毛巾擦干。
5.4 当待配母猪因公猪诱情极度兴奋时准备开始输精。从保温箱中取出一次性输精管,从输精管的头部将密封套撕开,将输精管海绵头用润滑剂或精液润滑,但输精管口部不要涂润滑油,以免精子凝集。
5.5 左手分开阴唇,右手将输精管向斜上方45度角(注意避开尿道开口)慢慢插入,并呈逆时针方向转动,当插入10~15cm后转成水平插入,当插入25~30cm感到有点阻力,此时输精管头部已到达子宫颈口,再将输精管旋转,稍一用力,海绵头即进入子宫颈,将会感到输精管被锁定,回拉输精管时会感到一定的阻力,此时即可输精。
5.6 从保温箱中取出精液瓶,小心混匀精液,拧掉瓶嘴,接上输精管,轻压输精瓶,确认精液能流出,用针头在输精瓶底部扎一个小孔,即可开始输精。输精时可压背刺激母猪,同时对母猪阴户、乳房或大腿内侧进行按摩,使子宫产生负压将精液吸纳,无需挤压输精瓶。
5.7 可通过调节输精瓶的高低来控制输精时间,输精的时间一般可控制在5~10分钟。输精太快,则精液回流的可能性加大。如果发生精液回流,应该将输精管放平,减慢输精速度,同时转动输精管,换方向输入,如果回流较多,应及时补输精液。输完精液后不要急于拔出输精管,应将精液瓶取下,将输精管尾部打折,插入去盖的输精瓶内,这样既可以防止精液倒流,又可防止空气进入子宫。最后让输精管自行滑落。
5.8 输精注意事项:精液从恒温冰箱取出后不用升温即可直接输精,但检查精子活力需要将玻片加热到37℃。当输精管插入过程中,如果遇到母猪排尿或者排粪污染输精管的情况,应及时更换输精管。输精过程中可采用多种方法刺激母猪兴奋,不可将精液强行挤入子宫。输精结束后,不应拍打母猪,否则引起母猪应激导致宫缩停止,精液倒流可能性增加。输精后应及时填写配种记录,并为此次输精评分,如实记录此次输精情况。
5.9 输精评分标准:母猪的站立发情:1分(差),2分(一些移动),3分(几乎没有移动)。输精管锁住程度:1分(没有锁住),2分(松散锁住),3分(持续牢固紧锁)。精液倒流程度:1分(严重倒流),2分(一些倒流),3分(几乎没有倒流)。具体评分方法:比如一头母猪站立反射明显,几乎没有移动,持续牢固紧锁,几乎没有倒流,则此次配种的输精评分为333。